小鼠孕酮(prog)酶聯(lián)免疫
檢測試劑盒使用說明書 ae90627mu
使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測小鼠孕酮(prog)，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
用途：用于小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中孕酮(prog)測定。
工作原理：
本試劑盒采用的是*雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（elisa）測定樣品中小鼠孕酮(prog)水平。向預(yù)先包被了小鼠孕酮(prog)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入小鼠孕酮(prog)，溫育；溫育后，加入*標(biāo)記的抗prog抗體。再與鏈霉親和素-hrp結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物a、b，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中小鼠孕酮(prog)的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成：
試劑盒組成
48孔配置
96孔配置
保存
說明書
1份
1份
封板膜
2片（48）
2片（96）
密封袋
1個
1個
酶標(biāo)包被板
1×48
1×96
2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品6400pmol/l
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
鏈霉親和素-hrp
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
*標(biāo)記的抗prog抗體
0.5ml×1瓶
1 ml×1瓶
2-8℃保存
顯色劑a液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
顯色劑b液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
終止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
濃縮洗滌液
（20ml×20倍）×1瓶
（20ml×30倍）×1瓶
2-8℃保存
需要而未提供的試劑和器材：
37℃恒溫箱。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。精密移液器及一次性吸頭蒸餾水，一次性試管吸水紙
注意事項(xiàng)：
從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。底物b對光敏感，避免長時間暴露于光下。
洗板方法：
手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中
標(biāo)本要求：
1．不能檢測含nan3的樣品，因nan3抑制辣根過氧化物酶的（hrp）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作程序：
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。)3200pmol/l
5號標(biāo)準(zhǔn)品
120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1600pmol/l
4號標(biāo)準(zhǔn)品
120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
800pmol/l
3號標(biāo)準(zhǔn)品
120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
400pmol/l
2號標(biāo)準(zhǔn)品
120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200pmol/l
1號標(biāo)準(zhǔn)品
120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。加樣：1）空白孔，空白對照孔不加樣品，*標(biāo)記的抗prog抗體，鏈霉親和素-hrp，只加顯色劑a&b和終止液，其余各步操作相同；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul，鏈霉親和素-hrp50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好*抗體，故不加)；3）待測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗prog抗體10ul、鏈霉親和素-hrp50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。顯色：每孔先加入顯色劑a50ul，再加入顯色劑b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（od值）。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的od值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的od值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。
操作程序總結(jié)：
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)r值為0.92以上。
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%
檢測范圍：
檢測范圍：100pmol/l→3500pmol/l。
保存條件及有效期：
保存：2-8℃。
有效期：6個月(2-8℃)。