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輔酶ⅰnad(h)含量試劑盒商品貨號：qs1000
英文名稱：nad(h) kit
別名：輔酶ⅰ含量測定試劑盒 nad(h) kit 輔酶ⅰnad(h)含量測定試劑盒 輔酶ⅰnad(h)含量測試盒
檢測方法：常量法
商品貨號：商品品牌：規(guī)格基本售價選擇規(guī)格
qs1000-50管/24樣 50管/24樣 ￥500.00元
產(chǎn)品詳細介紹產(chǎn)品說明書
測定意義：
輔酶ⅰnad(h)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，nad+是糖酵解（emp）和三羧酸循環(huán)（tca）的主要氫受體，生成的nadh經(jīng)呼吸電子鏈（etc）傳遞把電子交給氧，在合成atp的同時，形成大量的ros，同時nadh再生為nad+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。nad(h)含量和nadh/nad+比值的高低可用于評價糖酵解和tca循環(huán)的強弱。較高的nad(h)及nadh/nad+比值說明細胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態(tài)。此外，nadh/nad+比值升高也可抑制糖酵解和tca循環(huán)。另外，nad+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調(diào)控作用。
測定原理：
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中nad+和nadh，nadh通過pms的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（mtt）為甲瓚，在570nm下檢測吸光值；而nad+可被乙醇脫氫酶還原為nadh，進一步采用mtt還原法檢測。
貨號：qs1000 規(guī)格：50管/24樣
輔酶ⅰnad(h)含量試劑盒說明書
可見分光光度法
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
輔酶ⅰnad(h)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，nad+是糖酵解（emp）和三羧酸循環(huán)（tca）的主要氫受體，生成的nadh經(jīng)呼吸電子鏈（etc）傳遞把電子交給氧，在合成atp的同時，形成大量的ros，同時nadh再生為nad+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。nad(h)含量和nadh/nad+比值的高低可用于評價糖酵解和tca循環(huán)的強弱。較高的nad(h)及nadh/nad+比值說明細胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態(tài)。此外，nadh/nad+比值升高也可抑制糖酵解和tca循環(huán)。另外，nad+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調(diào)控作用。
測定原理：
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中nad+和nadh，nadh通過pms的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（mtt）為甲瓚，在570nm下檢測吸光值；而nad+可被乙醇脫氫酶還原為nadh，進一步采用mtt還原法檢測。
自備的實驗用品及儀器：
可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
酸性提取液：液體50ml×1瓶，4℃保存；
堿性提取液：液體50ml×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體15 ml×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體4 ml×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20 ℃避光保存，用時加入4ml蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃
保存一周；
試劑四：粉劑×1瓶，4 ℃避光保存，用時加入4ml蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保
存一周；
試劑五：液體1.8ml×1支，4 ℃保存；
試劑六：液體30ml×1瓶，4 ℃保存；
試劑七：液體50ml×1瓶，4 ℃保存。
nad+和nadh的提?。?br>1 血清（漿）中nad+和nadh的提取
nad+的提取：按照血清（漿）體積（ml）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1ml血清（漿），加入1ml酸性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。
nadh的提?。喊凑昭澹{）體積（ml）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1ml血清（漿），加入1ml堿性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2組織中nad+和nadh的提取：
nad+的提?。喊凑战M織質(zhì)量（g）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g組織，加入1ml酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。
nadh的提取：按照組織質(zhì)量（g）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g組織，加入1ml堿性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3 細胞或細菌中nad+和nadh的提?。?br>nad+的提?。合仁占毎蚣毦诫x心管內(nèi)，棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：酸性提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml酸性提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200w，超聲3s，間隔10s，重復30次），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g4℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。
nadh的提取：先收集細胞或細菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：堿性提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml堿性提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200w，超聲3s，間隔10s，重復30次），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g4℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至570nm，蒸餾水調(diào)零。加樣表(在1.5ml棕色ep管中按下表依次加樣）：試劑名稱(μl)
對照管
測定管
樣本
50
50
試劑一
250
250
試劑二
75
75
試劑三
75
75
試劑四
75
75
試劑五
35
35
試劑六
500
混勻，室溫避光靜置20min
試劑六
500
充分混勻，靜置5min后，20000g，25℃離心5min，棄上清，沉淀中加入：
試劑七
1000
1000
混勻，570nm下比色，讀取對照吸光值a1和測定管吸光值a2，計算△a=a2-a1。
注意事項：
1、如果一次性測定樣本數(shù)較多，可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。
2、對照管和測定管的測定步驟的區(qū)別：對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六；測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應(yīng)20min后再加試劑六。
3、反應(yīng)過程中注意避光。
4、由于每一個測定管需要設(shè)一個對照管，本試劑盒50管保證測24個nad+或nadh.。
nad+和nadh含量的計算：
（一）nad+含量的計算
1、血清（漿）中nad+含量計算
nad+含量(nmol/ml）=[ (△a -0.099）×36.1×v1) ]÷(v3×v1÷v2)= 722×(△a -0.099）
2、組織、細菌或細胞中nad+含量計算
(1)按樣本蛋白濃度計算
nad+ (nmol/mg prot）=[ (△a -0.099）×36.1×v1)]÷(v1×cpr)= 36.1×(△a -0.099）÷cpr
(2)按樣本鮮重計算
nad+ (nmol/g 鮮重）= [ (△a -0.099）×36.1×v1)]÷(w×v1÷v2)= 72.2×(△a -0.099）÷w
(3)按細菌或細胞密度計算
nad+ (nmol/104 cell）=[ (△a -0.099）×36.1×v1)]÷(500×v1÷v2)=0.1444×(△a -0.099）
（二）nadh含量的計算
1、血清（漿）中nadh含量計算
nadh含量(nmol/ml）= [ (△a -0.065）×24.7×v1) ]÷(v3×v1÷v2)= 494×(△a -0.065）
2、組織、細菌或細胞中nadh含量計算
(1)按樣本蛋白濃度計算
nadh (nmol/mg prot）= [ (△a -0.065）×24.7×v1) ]÷(v1×cpr)= 24.7×(△a -0.065）÷cpr
(2)按樣本鮮重計算
nadh (nmol/g 鮮重）= [ (△a -0.065）×24.7×v1) ]÷(w×v1÷v2)= 49.4×(△a -0.065）÷w
(3)按細菌或細胞密度計算
nadh (nmol/104 cell）= [ (△a -0.065）×24.7×v1) ]÷(500×v1÷v2)=0.0988×(△a -0.065）
v1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05ml；v2：加入提取液體積，2ml；v3：加入血清（漿）體積：0.1ml；cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml； w：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。
注意：低檢測限為1nmol/ml或1nmol/g鮮重 或0.01nmol/mg prot
輔酶ⅰ系列
qs1000 輔酶ⅰnad(h)含量測試盒 可見分光光度法 50管/24樣 500
ms1000 輔酶ⅰnad(h)含量測試盒 微量法 100管/48樣 920
qs1001 乳酸脫氫酶（ldh）測試盒 可見分光光度法 50管/24樣 170
ms1001 乳酸脫氫酶（ldh）測試盒 微量法 100管/48樣 330
qs1002 nad-蘋果酸脫氫酶（nad-mdh）測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣 280
ms1002 nad-蘋果酸脫氫酶（nad-mdh）測試盒 微量法 100管/96樣 550
qs1003 nadp-蘋果酸脫氫酶（nadp-mdh）測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣 320
ms1003 nadp-蘋果酸脫氫酶（nadp-mdh）測試盒 微量法 100管/96樣 600
qs1004 nadh氧化酶（nox）測試盒 可見分光光度法 50管/48樣 450
ms1004 nadh氧化酶（nox）測試盒 微量法 100管/96樣 850
qs1005-50 檸檬酸合酶(cs）測試盒 可見分光光度法 50管/48樣 3200
qs1005-25 檸檬酸合酶(cs）測試盒 可見分光光度法 25管/24樣 2000
ms1005 檸檬酸合酶(cs）測試盒 微量法 100管/48樣 3500
qs1006 丙酮酸脫羧酶（pdc）測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣 720
ms1006 丙酮酸脫羧酶（pdc）測試盒 微量法 100管/96樣 1400
qs1007 醇脫氫酶（adh）測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣 280
ms1007 醇脫氫酶（adh）測試盒 微量法 100管/96樣 550
qs1008 單脫氫抗壞血酸還原酶（mdhar）測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣 800
ms1008 單脫氫抗壞血酸還原酶（mdhar）測試盒 微量法 100管/96樣 1550
qs1009 乙醛脫氫酶（aldh）測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣 420
ms1009 乙醛脫氫酶（aldh）測試盒 微量法 100管/96樣 800
qs1010 nad激酶（nadk）測試盒 可見分光光度法 50管/48樣 600
ms1010 nad激酶（nadk）測試盒 微量法 100管/48樣 1100
qs1011 線粒體呼吸鏈復合體ⅰ/nadh-輔酶q還原酶測試盒 紫外分光光度法 25管/24樣 1280
ms1011 線粒體呼吸鏈復合體ⅰ/nadh-輔酶q還原酶測試盒 微量法 100管/96樣 2500