nmt作為生命科學底層核心技術，是建立活體創(chuàng)新科研平臺的*技術。2005年~2020年，nmt已扎根中國15年。2020年，中國nmt銷往瑞士蘇黎世大學，正式打開歐洲市場。
基本信息
主題： nkcc2（離子轉(zhuǎn)運體）參與胃酸分泌的實時生理證據(jù)
期刊：european journal of pharmacology
影響因子：3.17
研究使用平臺：nmt活體組織創(chuàng)新科研平臺
標題：na+-k+-2cl- cotransporter 2 located in the human and murine gastric mucosa is involved in secretagogue-induced gastric acid secretion and is downregulated in lipopolysaccharide-treated mice
作者：首都醫(yī)科大學朱進霞、鄭麗飛
檢測離子/分子指標
h+
檢測樣品
小鼠胃黏膜活體組織
中文摘要（谷歌機翻）
na+-k+-2cl-轉(zhuǎn)運蛋白（nkcc）在胃壁細胞中的表達異常高。*是一種強效的利尿劑，可阻斷nkcc，通常會導致胃酸分泌減少。內(nèi)毒素血癥在體內(nèi)引起低血脂癥，其中脂多糖（lps）起著重要作用。這項研究旨在調(diào)查nkcc2對lps治療的小鼠胃酸分泌及其改變的影響。非損傷微測技術（non-invasive micro-test technology，nmt）和實時ph滴定結合rna干擾被用來確定*對胃酸分泌的影響。進行了免疫化學和蛋白質(zhì)印跡研究以調(diào)查lps處理的小鼠中nkcc2表達的變化。nkcc1和nkcc2的免疫反應性主要觀察到壁細胞的基底外側和頂膜附近。用*預處理可降低小鼠胃粘膜中組胺刺激的h+流速。*的頂端而不是基底外側的添加抑制了福司可林或組胺/3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（ibmx）誘導的胃酸分泌。nkcc2 sirna的體內(nèi)治療可抑制毛喉素誘導的酸分泌。在組胺刺激后，大部分nkcc2靶向胃粘膜和原代培養(yǎng)的壁細胞中的頂膜。lps處理的小鼠的胃黏膜中nkcc2和囊泡相關膜蛋白2（vamp2）的表達降低，但h+/k+-atpase的表達沒有降低。*阻斷頂葉nkcc2而不是基底外側nkcc1可抑制促分泌素誘導的胃酸分泌，在此期間可能需要nkcc2的膜運輸。nkcc2和vamp2的下調(diào)可能與lps誘導的胃酸分泌減少有關。
離子/分子流實驗處理方法
10 μm布美他尼、100 μm組胺、300 μm*分別處理小鼠胃黏
離子/分子流實驗結果
圖1b所示的折線圖是使用nmt技術監(jiān)測小鼠胃黏膜h+流速變化的結果。加入組胺（100 μm）引起h+流速增加，從0.52±0.02增加到0.74±0.03 pmol cm-2 s-1，這被組胺h2受體拮抗劑*（300 μm）抑制（圖1c）。*（10 μm）預處理可明顯抑制組胺誘導的h+流速，但對基礎h+流速無影響，表明nkcc在促酸分泌中起作用。
圖1 不同處理下小鼠胃黏膜h+流速的變化情況
其他實驗結果
雙重染色免疫熒光結果表明，nkcc1的免疫反應性（ir）主要出現(xiàn)在表達h+/k+-atpase的細胞的基底外側膜，nkcc2 ir在小鼠和人胃粘膜中h+/k+-atpase陽性細胞的頂端側突出。在培養(yǎng)的大鼠胃壁細胞中也觀察到nkcc2 ir。nkcc2信號也作為陽性對照在小鼠和大鼠腎臟中進行研究，發(fā)現(xiàn)在腎小管的頂端觀察到強烈的nkcc2 ir。
在靜息條件下，*在腔管或漿膜的處理均未顯著抑制胃酸分泌。這些結果表明，抑制頂端膜上高表達的nkcc2，可以顯著抑制促分泌素誘導的胃酸分泌。
nkcc2基因敲除可降低forskolin刺激的胃酸分泌。
組胺刺激nkcc2在胃粘膜和培養(yǎng)壁細胞中的易位。
脂多糖（lipopolysaccharide，lps）處理的小鼠中nkcc2和vamp2表達降低。
結論
本研究揭示了nkcc2（*的腔管靶點）在維持胃酸分泌中的重要性。特別是，我們提出的證據(jù)表明nkcc2的膜轉(zhuǎn)位可能與酸分泌有關。這些發(fā)現(xiàn)為胃酸分泌的復雜機制提供了新的見解。nkcc2和vamp2的下調(diào)可能與lps誘導的胃酸分泌減少有關。
離子流實驗使用的測試液
141.8 mm nacl, 5.9 mm kcl, 1.2 mm mgcl2, 10 mm hepes acid, 5.6 mm tris, 2.56 mm cacl2, 2 g glucose, ph 7.4