人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（huvec）的培養(yǎng)是一項(xiàng)重要的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。下面將詳細(xì)介紹huvec的培養(yǎng)步驟，并分享一些經(jīng)驗(yàn)。
1.準(zhǔn)備工作：
a. 15-20cm長(zhǎng)的新生兒臍帶放入無(wú)菌的pbs溶液中儲(chǔ)存。
b.注意臍帶最多貯存24小時(shí)在4℃下，室溫下不超過(guò)6小時(shí)。
2.洗滌臍帶：
a.使用一個(gè)鈍頭的針頭扎入臍帶靜脈管中，用無(wú)菌的pbs溶液沖洗3-5次，直至污血沖洗干凈。
3.消化臍帶：
a.用手術(shù)鉗夾緊臍帶下端，加入15ml的膠原酶（1mg/ml）室溫下消化15-20分鐘，并不時(shí)上下?lián)u動(dòng)臍帶。
4.收集消化液：
a.消化完后，將下端手術(shù)鉗松開(kāi)，消化液流入一個(gè)50ml無(wú)菌離心管中，用無(wú)菌的pbs溶液沖洗臍帶2-3次。
5.離心：
a.將收集液離心（2000轉(zhuǎn)/分）3分鐘。
6.轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中：
a.倒去上清，加入10ml m199培養(yǎng)基（加入10u/ml的bfgf），用彎管吹散細(xì)胞，將所有液體轉(zhuǎn)入一個(gè)用明膠包被好的培養(yǎng)瓶中，37℃培養(yǎng)。
b.在每個(gè)培養(yǎng)瓶中加入3-4ml無(wú)菌的1%明膠溶液，搖勻使得明膠溶液鋪滿瓶底，放入37℃孵育，最少2小時(shí)，用前將明膠溶液倒掉即可。明膠包被有利于細(xì)胞貼壁。
7.培養(yǎng)細(xì)胞：
a.培養(yǎng)24小時(shí)后，倒掉培養(yǎng)基，并用無(wú)菌的pbs溶液清洗2-3次，洗掉紅細(xì)胞和死細(xì)胞，加入10ml新鮮的m199培養(yǎng)基。
8.換培養(yǎng)基：
a.以后每2天換一次培養(yǎng)基（每次換掉2/3的培養(yǎng)基）。
9.細(xì)胞生長(zhǎng)：
a.一般培養(yǎng)5-7天，細(xì)胞可長(zhǎng)滿至80-90%單層，這時(shí)可以進(jìn)行傳代。
10.傳代：
a.倒掉培養(yǎng)基，用無(wú)菌的pbs溶液清洗2-3次，加入2-3ml消化液（0.25%胰酶+0.1%edta）消化細(xì)胞，在顯微鏡下觀察，一旦細(xì)胞變圓，即加入2-3倍有血清的dmem培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
b.用彎管將細(xì)胞吹打下來(lái)，并將所消化的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到一個(gè)50ml無(wú)菌離心管中，2000轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘。
c.倒掉上清，加入10ml新鮮培基，一般一瓶細(xì)胞可傳代3-4瓶。以后照此傳代培養(yǎng)。
11.優(yōu)化培養(yǎng)：
a.一般傳代2-3代（培養(yǎng)了20天左右）用于各種實(shí)驗(yàn)效果較好。
以上是人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（huvec）的培養(yǎng)步驟，希望對(duì)你有所幫助。