本試劑盒僅供研究使用。
96t
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定人血清,血漿樣本中乙型肝炎e抗原（hbeag）表達(dá)。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人乙型肝炎e抗原（hbeag）表達(dá)。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中乙型肝炎e抗原（hbeag）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與hrp標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)洗滌后加底物tmb顯色。tmb在hrp酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（od值），與cutoff值相比較，從而判定標(biāo)本中人乙型肝炎e抗原（hbeag）的存在與否。
試劑盒組成
1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7
陽(yáng)性對(duì)照
0.5ml×1瓶
2
酶標(biāo)試劑
6ml×1瓶
8
陰性對(duì)照
0.5ml×1瓶
3
酶標(biāo)包被板
12孔×8條
9
說(shuō)明書
1份
4
顯色劑a液
6ml×1瓶
10
封板膜
2張
5
顯色劑b液
6ml×1/瓶
11
密封袋
1個(gè)
6
終止液
6ml×1瓶
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇edta或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 不能檢測(cè)含nan3的樣品，因nan3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（hrp）活性。
操作步驟：
編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。待測(cè)樣品孔中加待測(cè)樣本50μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液：將30（48t的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
顯色：每孔先加入顯色劑a 50μl，再加入顯色劑b 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（od值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算和結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.20
臨界值（cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品od值<臨界值（cut off）者為乙型肝炎e抗原（hbeag）陰性
陽(yáng)性判定：樣品od值≥臨界值（cut off）者為乙型肝炎e抗原（hbeag）陽(yáng)性。
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請(qǐng)避光保存。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2m的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月
關(guān)鍵詞：酶標(biāo)儀