人elisa試劑盒是常用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷的實(shí)驗(yàn)工具，其原理基于酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，抗體是免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)分子，可以識(shí)別并結(jié)合特定的抗原，形成抗原-抗體復(fù)合物。elisa試劑盒通常包含有特異性與目標(biāo)抗原結(jié)合的抗體。分為直接elisa、間接elisa、競(jìng)爭(zhēng)elisa和間接競(jìng)爭(zhēng)elisa等多種類型。
人elisa試劑盒的步驟如下：
1.固定抗原：在試驗(yàn)板表面上固定抗原。通常將抗原溶液加入試驗(yàn)孔并孵育，使抗原與試驗(yàn)板表面結(jié)合。
2.阻斷：通過(guò)加入一種非特異性蛋白(如牛血清蛋白)來(lái)封閉試驗(yàn)孔表面的未被固定的地方，以防止非特異性結(jié)合。
3.添加樣品：加入含有可能存在目標(biāo)抗原的樣品，樣品中的目標(biāo)抗原與試板上的固定抗原結(jié)合。
4.洗滌：洗滌試板以去除非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)。
5.加入初級(jí)抗體：加入與目標(biāo)抗原結(jié)合的初級(jí)抗體。初級(jí)抗體可以是直接標(biāo)記的，也可以是未標(biāo)記的。
6.洗滌：洗滌試板以去除未結(jié)合的初級(jí)抗體。
7.加入二級(jí)抗體：加入與初級(jí)抗體結(jié)合的二級(jí)抗體。二級(jí)抗體一般是與酶結(jié)合的抗體，如辣根過(guò)氧化物酶(horseradishperoxidase，hrp)標(biāo)記的抗體。
8.洗滌：洗滌試板以去除未結(jié)合的二級(jí)抗體。
9.加入底物：加入一種酶底物，通常為染色底物。該底物可以與酶發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生可見(jiàn)的顏色變化。
10.反應(yīng)終止：加入酶反應(yīng)終止劑，停止底物的反應(yīng)，并保留底物的顏色變化。
11.測(cè)量：使用光譜儀或讀板儀器測(cè)量試驗(yàn)孔中底物的顏色強(qiáng)度，該強(qiáng)度與目標(biāo)抗原的濃度相關(guān)。
通過(guò)測(cè)量底物的顏色強(qiáng)度，可以確定樣品中目標(biāo)抗原的含量。人elisa試劑盒的靈敏度高，可以檢測(cè)低濃度的抗原，并具有分析簡(jiǎn)單、高通量的優(yōu)點(diǎn)，因此被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷和科學(xué)研究領(lǐng)域。