atp依賴性dna連接酶ⅰ(lig1)重組蛋白人操作步驟:
ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取
1. 在每1ml 冷lysis buffer加入10 μl磷酸酶抑制劑, 1 μl蛋白酶抑制劑和 5μl 100mm pmsf,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 ml冷 lysis buffer,玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5ml預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4℃離心5 min;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(bradford法、bca法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10ml/150mm培養(yǎng)板的冷pbs洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10ml/150mm培養(yǎng)板的冷pbs,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1ml冷 lysis buffer加入10μl磷酸酶抑制劑, 1μl蛋白酶抑制劑和5μl 100mm pmsf,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4. 細(xì)胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷lysis buffer,加入量如下表所示:
小鼠胱天蛋白酶5(casp-5)elisa kitmouse caspase-5,casp5 elisa kit
小鼠胱天蛋白酶3(casp-3)elisa kitmouse caspase 3,casp-3 elisa kit
小鼠胱天蛋白酶10(casp-10)elisa kitmouse caspase-10,casp10 elisa kit
小鼠骨形成蛋白6(bmp-6)elisa kitmouse bone morphogenetic protein 6,bmp-6 elisa kit
小鼠骨形成蛋白(bmps)elisa kitmouse bone morphogenetic proteins,bmps elisa kit
小鼠骨涎蛋白(bsp)elisa kitmouse bone sialoprotein,bsp elisa kit
小鼠骨特性堿性磷酸酶c端肽elisa kitmouse c-terminal peptide of bone-specific alkaline phosphatase elisa kit
小鼠骨特性堿性磷酸酶(balp)elisa kitmouse bone-specific alkaline phosphatase,balp elisa kit
小鼠骨成型蛋白9(bmp-9)elisa kitmouse bone morphogenetic protein 9,bmp-9 elisa kit
小鼠骨成型蛋白15(bmp-15)elisa kitmouse bone morphogenetic protein 15,bmp-15 elisa kit
小鼠谷胱甘肽過氧化酶(gsh-px)elisa kitmouse glutathione peroxidase,gsh-px elisa kit
小鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體igm(gad-ab-igm)elisa kitmouse glutamic acid decarboxylase autoantibody igm,gad-ab-igm elisa kit
小鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體igg(gad-ab-igg)elisa kitmouse glutamic acid decarboxylase autoantibody igg,gad-ab-igg elisa kit
小鼠谷氨酸脫氫酶(gdh/gldh)elisa kitmouse glutamate dehydrogenase,gdh/gldh elisa kit
小鼠孤腓肽(ofq/n)elisa kitmouse orphanin fq/nociceptin,ofq/n elisa kit
小鼠鉤端螺旋體igg(lep igg)elisa kitmouse leptospira antibody(igg)elisa kit
小鼠高鐵血紅蛋白(mhb)elisa kitmouse methemoglobin,mhb elisa kit
小鼠高爾基蛋白73(gp-73)elisa kitmouse golgi protein 73,gp-73 elisa kit
小鼠高半胱氨酸(hcy)elisa kitmouse homocysteine,hcy elisa kit
小鼠肝脂酶(hl)elisa kitmouse hepatic lipase,hl elisa kit