硝基呋喃類抗生素藥物及其代謝物具有制畸胎副作用，且能誘發(fā)癌癥，引起了人們的高度關(guān)注。歐盟、美國(guó)、中國(guó)等諸多和地區(qū)先后禁止在動(dòng)物源性食品中使用，檢測(cè)限為不得檢出。硝基呋喃原藥 對(duì)光敏感，在動(dòng)物體內(nèi)迅速被代謝，故檢測(cè)在食品中的代謝物。
化學(xué)試劑 硝基呋喃（nitrofuran）化合物名稱、分子式和ca號(hào)： 呋喃它酮 3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinon，其代謝物為amoz，c8h15n3o3，cas: 43056-63-9 * 3-amino-2-oxazolidinone ，其代謝物為aoz，c3h6n2o2，cas: 80-65-9 * semicarbazide，其代謝物為 sem，ch5n3o，cas: 57-56-7 * 1-amino-hydantoin ，其代謝物為ahd，c3h5n3o2，cas: 2827-56-7 硝基呋喃化合物及代謝物的結(jié)構(gòu)：
a：將藥物代謝物從組織中提取出來；b：藥物代謝物與2-硝基苯j(luò)ia醛(2-nba，c7h5no3，cas: 552-89-6) 的衍生化反應(yīng)。 建議的內(nèi)標(biāo)：d4-aoz，d5-amoz，13c15n2-sem，13c3-ahd。
色譜分離流動(dòng)相的制備 1 m乙酸銨溶液：77 g乙酸銨溶解于1 l hplc級(jí)的水中。 流動(dòng)相a：在1 l hplc級(jí)的水中，加入1 ml 1 m 乙酸銨溶液。 流動(dòng)相b：在1 l hplc級(jí)的甲醇中，加入1 ml 1 m 乙酸銨溶液。
樣品制備(肉、蝦樣品) 基于 leitner 等人提出的方法[1]： 1． 稱取1 g勻漿的組織樣品； 2．加入內(nèi)標(biāo)； 3．加入0.125 m鹽酸和2-硝基苯j(luò)ia醛(2-nba)； 4．調(diào)節(jié)ph值為7.4； 5．離心； 6．用乙酸乙酯在 extrelut 柱上提取上清液； 7．揮干溶劑； 8．用500 µl流動(dòng)相[水+1 mm乙酸銨 / 甲醇＝90 / 10]。 回收率[2]：aoz ～70%；amoz ～80%；sem ～70%；ahd ～70%。
樣品制備(肝臟組織) 基于conneely等人提出的方法[3]： 1．稱量5 g浸水并勻漿過的肝臟組織，衍生化過夜； 2．將樣品溶液ph值調(diào)成中性，用乙酸乙酯提取，揮干溶劑； 3．將殘?jiān)苡? ml水中，上樣到準(zhǔn)備好的max柱上； 4．先用2%氨水溶液3 ml清洗，然后用3 ml甲醇進(jìn)行洗脫，揮干溶劑； 5．將殘?jiān)苡? ml水中，上樣到準(zhǔn)備好的hlb柱上； 6．先用2%乙酸溶液(溶劑：水 + 甲醇＝1/1) 3 ml清洗； 7．然后用3 ml溶于90%甲醇中的2%的氨水溶液進(jìn)行洗脫。
樣品制備(蜂蜜樣品) 基于blake等人提出的方法[1]： 1．加50 µl內(nèi)標(biāo)溶液到5 g蜂蜜中； 2．熱水中超聲5 min，使混合均勻； 3．加入20 ml 0.3 m鹽酸(混合300 ml 1 m hcl和700 ml的水制成)，振搖使均勻； 4．加入1 ml衍生化試劑(將1 g 2-nba溶解于50 ml二甲亞砜dmso中制成，用前新鮮配制)； 5．渦流混旋1 min，使混合均勻，37 ℃保溫16 h進(jìn)行衍生化； 6．加入2 ml 1 m磷酸緩沖液(磷酸緩沖液ph=7.4)，加入1 m naoh(7.3～8.2 ml)到溶液ph=7±0.5，注 意：ph值不可以超過7.5； 7．加入15 ml hplc級(jí)的乙酸乙酯，渦旋混合5 min； 8．在3000 r/min離心10 min，直至有機(jī)相與水相明顯分層，如果沒有很好分層，繼續(xù)離心；分析硝基呋喃代謝物的實(shí)驗(yàn)方法9．仔細(xì)轉(zhuǎn)移上面乙酸乙酯層溶液5 ml，到一干凈的16 mm×100 mm的玻璃試管中意不要將下面 水層溶液帶入； 10．蒸發(fā)到只剩1 ml左右； 11．再仔細(xì)轉(zhuǎn)移出3 ml上層乙酸乙酯溶液，到相同玻璃試管中； 12．蒸發(fā)到只剩1/2時(shí)，渦旋混合，再蒸發(fā)至干； 13．加入200 µl甲醇進(jìn)行溶解，再加入200 µl水，混合均勻。然后取出200 µl到樣品瓶中，備用。
色譜分離條件 agilent 1100 系統(tǒng)：g1312a二元泵系統(tǒng)、g1367a型自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱。 色譜柱：phenomenex luna，3 µm，c18(2)，150 mm×2 mm。 流動(dòng)相：a相—水 + 1 mm 乙酸銨；b相—甲醇 + 1 mm 乙酸銨。 梯度設(shè)置：
ms/ms檢測(cè) abapi 3000™ lc-ms/ms液質(zhì)聯(lián)用儀系統(tǒng)，turboionspray® 離子源，正離子模式，mrm掃描方式