中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
gb/t 23584-2009
水果、蔬菜中啶蟲脒殘留量的測(cè)定
液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法
前言
本標(biāo)準(zhǔn)的附錄a、附錄b均為資料性附錄。
本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：國(guó)家加工食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心（山東）、天津市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)技術(shù)研究院。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王駿、張卉、祝建華、張喜琦、劉祥、華京君、胡梅、楊穎。
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水果、蔬菜中啶蟲脒殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于水果、蔬菜中啶蟲瞇殘留量的測(cè)定。
本標(biāo)準(zhǔn)定量限：0.01 mg/kg。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)。然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
gb/t 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（gb/t 6682-2008，iso 3696：1987，mod）
3原理
試樣經(jīng)粉碎、混勻后，以酸性乙腈提取，經(jīng)基質(zhì)分散固相萃取凈化后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。
4試劑和材料
除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為gb/t 6682規(guī)定的一級(jí)水。
4.1乙腈：色譜純。
4.2甲醇：色譜純。
4.3甲酸：色譜純。
4.4乙酸。
4.5氯化鈉。
4.6無(wú)水硫酸鎂。
4.7乙酸-乙腈溶液：1 +99（體積比）。
4.8甲酸水溶液：0.1%（體積分?jǐn)?shù)）。
4.9n-丙基乙二胺（psa）吸附劑：150μm~ 300μm。
4.10十八烷基鍵和硅膠（c18）吸附劑；150μm~300μm。
4.11啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)品：啶蟲脒含量不低于96. 0%。
4.12標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取10.0mg啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解并定容于100ml容量瓶中，此溶液濃度為100μg/ ml，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液；4℃冷藏保存，有效期3個(gè)月。
4.13標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（4.12）適量，用乙腈稀釋成濃度為0.05μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ ml的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
4.14微孔濾膜：孔徑0.22μm，有機(jī)相。
5儀器和設(shè)備
5.1液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀：配有電噴霧電離源。
5.2分析天平：感量0.1 mg。
5.3組織搗碎機(jī)。
5.4超聲波振蕩器。
5.5渦旋混合器。
5.6振蕩器。
5.7高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于10000 r/min。
6樣品制備
取有代表性的水果、蔬菜樣品適量，將可食用部分充分搗碎、混勻，置于潔凈的容器中，密封并做好標(biāo)記，于-18℃避光冷凍保存。
7樣品處理
7.1提取
稱取5g（精確到0.01g）試樣勻漿，置于30 ml具塞離心管中，加入5 ml乙酸-乙腈溶液（4.7），搖勻，超聲波提取15 min，加入5g氯化鈉，蓋上塞子，振蕩5min，4000 r/min離心5min，將上層有機(jī)相轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中。在離心管中再加入4ml乙酸-乙腈溶液（4.7），重復(fù)上述操作，合并有機(jī)相至同一10ml容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻。
7.2凈化
移取7.1中提取液1.5 ml，加入預(yù)先裝有300mg無(wú)水硫酸鎂的離心管中，混勻后再加入50 mgc18吸附劑（4.10）、100 mg psa吸附劑（4.9），渦旋混合1 min，10000 r/min離心5min，移取上清液200μl，加入800μl水，混勻后經(jīng)微孔濾膜（4.14）過濾備用。
8測(cè)定
8.1操作條件
8.1.1液相色譜條件
a）色譜柱：c18柱，50mm×2.1mm（內(nèi)徑），1.7μm，或相當(dāng)者；
b）流動(dòng)相及梯度洗脫條件見表1；
c）流速：0.30ml/min；
d）柱溫：40℃；
e）進(jìn)樣量：10μl。
8.1.2質(zhì)譜參考條件
參見附錄a。
8.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
稱取相同基質(zhì)的空白樣品5份，每份5g（精確至0.01g），分別加入系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（4.13）各1.00ml，按7.1和7.2操作，所得系列溶液中啶蟲脒的濃度依次為：1.0ng/ml、5.0ng/ml、10.0ng/ml、50.0ng/ml、100.0ng/ml。按照濃度由低到高進(jìn)樣檢測(cè)，以定量離子峰面積濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。啶蟲脒標(biāo)樣的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)量色譜圖參見附錄b中的圖b.1。
8.3測(cè)定
8.3. 1定性測(cè)定
將空白添加標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)樣品在上述條件下進(jìn)樣測(cè)定，若樣品和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量色譜圖中啶蟲脒的保留時(shí)間一致，且定性離子對(duì)的相對(duì)豐度偏差符合表2的規(guī)定，則可判定樣品中存在啶蟲脒殘留。
8.3.2定量測(cè)定
外標(biāo)法定量。待測(cè)樣液中啶蟲脒的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。
8.4結(jié)果計(jì)算
按式（1）計(jì)算試樣中啶蟲脒殘留量：
式中：
x——樣品中啶蟲脒殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的測(cè)定液中啶蟲脒的濃度，單位為納克每毫升（ng/ml）；
v——測(cè)定液定容體積，單位為毫升（ml）；
m——樣品質(zhì)量，單位為克（g）。
測(cè)定結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，以兩次平行測(cè)定的算術(shù)平均值報(bào)出結(jié)果。
8.5空白實(shí)驗(yàn)
除不稱取樣品外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。
9方法定量限
本方法的定量限為0. 01 mg/kg。
10回收率
在添加濃度0.01mg/kg~1.0mg/kg濃度范圍內(nèi)，回收率在80%~110%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于
10%。
11允許差
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。