細(xì)胞生長狀態(tài)受多種因素影響，在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，我們知道溫度不能過高也不能過低，有些細(xì)胞培養(yǎng)前還需要包被培養(yǎng)瓶，但實(shí)驗(yàn)過程中我們很容易忽略這些小因素，導(dǎo)致細(xì)胞負(fù)傷慘重。
這些小細(xì)節(jié)究竟如何影響的細(xì)胞狀態(tài)？在培養(yǎng)時(shí)我們又該如何避免？本期整理了影響細(xì)胞生長最chang見的五類因素，助您完mei避坑！
01細(xì)胞生長附著物
貼壁細(xì)胞在正常情況下都會(huì)貼壁，但某些細(xì)胞本身貼壁不牢或貼壁性差，而包被附著物能夠促進(jìn)細(xì)胞的黏附，所以在培養(yǎng)一些特殊細(xì)胞時(shí)，需要對培養(yǎng)瓶/皿進(jìn)行包被后使用。常用的基質(zhì)有多聚賴氨酸（d型、l型）、明膠、膠原蛋白、細(xì)胞外基質(zhì)混合物，培養(yǎng)時(shí)可根據(jù)需要自行選擇。
小貼士
細(xì)胞貼壁差時(shí)可使用基質(zhì)包被培養(yǎng)瓶/皿。
02細(xì)胞之間的接觸程度
正常細(xì)胞（二倍體）存在貼壁接觸抑制，長滿后細(xì)胞生長停止，而腫瘤細(xì)胞等非正常細(xì)胞，接觸抑制作用較弱，可生長至較高的細(xì)胞密度，但某些細(xì)胞一旦長過，其損傷難以逆轉(zhuǎn)，所以培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)不建議細(xì)胞密度太高。
小貼士
無論什么細(xì)胞，都不能長滿再傳代，一般細(xì)胞匯合度達(dá)到70-80%即可傳代。
03培養(yǎng)基ph值
大多數(shù)細(xì)胞系在ph7.4左右時(shí)生長最hao，而常規(guī)培養(yǎng)基的指示劑為酚紅，所以多數(shù)情況下，我們所見的培養(yǎng)基都呈紅色，但不同培養(yǎng)基的顏色會(huì)有差異，例如dmem比1640顏色深一點(diǎn)。在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，也可以根據(jù)培養(yǎng)基的顏色判斷細(xì)胞狀態(tài)，如隨著細(xì)胞生長，ph值會(huì)變成黃色。
小貼士
培養(yǎng)時(shí)時(shí)刻關(guān)注培養(yǎng)基顏色變化，發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)處理。
圖1.培養(yǎng)基ph值對應(yīng)顏色
04氣相成分
大部分培養(yǎng)基適合于95%空氣5%co2，但有部分培養(yǎng)基例外，如l15培養(yǎng)基適合于100 %空氣，co2會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)液ph降低（培養(yǎng)液變黃），嚴(yán)重影響細(xì)胞生長；若需要用l15培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，但沒有100 %空氣培養(yǎng)箱時(shí)，可以擰緊瓶蓋或換培養(yǎng)基（效果可能更好）培養(yǎng)。適用于co2環(huán)境的培養(yǎng)基需保持培養(yǎng)瓶透氣。
小貼士
培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)注意參照說明書選擇培養(yǎng)基，并注意培養(yǎng)壞境。
05培養(yǎng)溫度
對于大部分人源細(xì)胞和溫血?jiǎng)游锛?xì)胞系來講，比較適宜的培養(yǎng)溫度是37℃，因?yàn)檫@個(gè)溫度接近體溫，但為了安全可以再稍低一些，高于體溫的溫度要比低于體溫的溫度更易產(chǎn)生問題。對于鳥類細(xì)胞，由于其體溫較高，所以培養(yǎng)溫度可以設(shè)置為38.5℃左右。
小貼士
培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)保持溫度穩(wěn)定，不要長時(shí)間敞開培養(yǎng)箱的門，并且不要將培養(yǎng)器皿大量重疊堆放在培養(yǎng)箱中，避免空氣不循環(huán)。
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