標簽：電泳瓊脂糖凝膠電泳 電泳設(shè)備 蛋白電泳 緩沖液
瓊脂糖凝膠電泳是鑒定核酸、蛋白分子量的常用方法，通過瓊脂糖凝膠電泳實驗分析，可以有效地識別出核酸類型及dna片段的大小。
實驗前準備：
1、瓊脂糖凝膠：瓊脂糖凝膠的配置濃度需要根據(jù)dna片段長度的大小而定。具體的瓊脂糖凝膠的配置濃度參考范圍如下：
2、緩沖液：核酸的電泳緩沖液主要有有tris-硼酸(tbe)、tris-乙酸(tae)和tris-磷酸(tpe)3種。實驗中多選用tbe緩沖液，如果考慮成本因素的話也可以嘗試使用tae緩沖液。tpe緩沖液磷酸鹽濃度較高，在進行dna回收時容易形成沉淀。10xtbe緩沖液可以直接購買，也可以自行配制。
10xtbe緩沖液配制方法如下：
tris:108克
edta: 9.3克
硼酸:55克
加純水到1000ul (ph為8.0～8.2之間) ，使用時用20倍的水稀釋到0.5xtbe即可。
3、指示劑的使用
指示劑：在dna電泳實驗中常用的指示劑主要為溴二甲藍和二甲苯青等。堿性環(huán)境下的溴二甲藍呈現(xiàn)紫藍色，在不同濃度的瓊脂糖凝膠中的遷移速率也不相同。比如：在0.6%濃度的凝膠中的遷移率與1kb長度的dna片段基本一致。而在1%左右濃度的瓊脂糖凝膠中遷移速率與0.6kb長度的雙鏈dna片段基本一致。
二甲苯青溶于水呈現(xiàn)藍色，同樣在濃度不同的凝膠中二甲苯青的遷移速率也是不相同的，比如在1%瓊脂糖凝膠電泳時，其遷移速率大致與2kb雙鏈dna接近。
4.染色劑的使用
染色劑：核酸電泳后，需經(jīng)染色后才能顯現(xiàn)出帶型，瓊脂糖凝膠實驗較為常用的是eb染色，也就是溴化乙錠染色法。根據(jù)實際實驗情況，可在凝膠電泳緩沖液中加入濃度為0.5ug/ml的溴化乙錠，或電泳后將凝膠置入濃度為0.5ug/mleb溶液中染色10-15分鐘。即可看到條帶。值的注意的是eb濃度如果過高會影響到條帶的清晰度。
5.核酸電泳設(shè)備：
核酸電泳設(shè)備主要包括電泳儀、電泳槽、梳子等。
6.核酸電泳方法
（1）在用純水清洗過的電泳槽里放置好梳子。
（2）將稀釋好的0.5xtbe緩沖液加入三角瓶中，并加入定量的瓊脂粉，根據(jù)實驗要求配置好對應(yīng)的瓊脂糖凝膠。待冷卻到60°c時即可加入eb。緩慢倒入電泳槽中凝固。
（3）待膠凝固后，箱電泳槽中緩緩加入0.5xbe濃度的tbe，加入量以淹沒膠面2mm為宜。
（4）打開電源，進行電泳操作。
（5）根據(jù)電泳條帶進行電泳分析比對。
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