背景
葉黃素、玉米黃質(zhì)、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素是天然植物性食品中z為常見的5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質(zhì)，具有*原活性、抗氧化、參與細胞傳遞、免疫功能調(diào)節(jié)與促進、保護皮膚免于紫外線傷害和抑制黃褐斑生成等諸多生理保健功效。
但這5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質(zhì)的液相色譜同時分離測定一直比較困難，原因是這5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質(zhì)之間的極性差異比較大，葉黃素和玉米黃質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中有兩個羥基，極性較強，在反相液相色譜柱（如c18等）上的保留力較弱，而α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素是烴類物質(zhì)，僅由碳和氫兩種原子構(gòu)成，無任何極性官能基團，極性極弱，在反相液相色譜柱（如c18等）上的保留力*；另外，更為重要是葉黃素和玉米黃質(zhì)之間，以及α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素之間，兩兩互為同分異構(gòu)體，相互間僅是一個碳-碳雙鍵的位置差異，液相分離難度大（分子結(jié)構(gòu)詳見附錄a，特征吸收光譜圖詳見附錄b）。
本應用案例采用月旭科技公司生產(chǎn)的c30反相高效液相色譜柱、兩元梯度洗脫，實現(xiàn)了單次高效液相色譜檢測對葉黃素、玉米黃質(zhì)、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素這5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質(zhì)的分離檢測，且單次高效液相色譜檢測費時為35分鐘。
高效液相色譜檢測條件
1 儀器設備
welch 高效液相色譜儀，wisys5000，配備二級管陣列檢測器；
2 液相色譜柱
分析柱：ultimate xb-c30色譜柱，4.6mm×250mm, 5μm；
保護柱：ultimate xb-c30，4.6mm×10mm, 5μm；
3 流動相
a相：甲醇:乙腈=1:1；b相：乙酸乙酯；
4 梯度洗脫程序
5 流速
1.0ml/min；
6 檢測波長
476nm；
7 柱溫
30℃；
8 進樣體積
20μl。
高效液相分離色譜圖
從高效液相檢測的色譜圖看，不僅單次檢測，35分鐘內(nèi)實現(xiàn)同時分離檢測葉黃素、玉米黃質(zhì)、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素這5種類胡蘿卜素類營養(yǎng)物質(zhì)，而且互為同分異構(gòu)體的葉黃素和玉米黃質(zhì)之間，以及α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素之間，都基本實現(xiàn)了基線分離。
相關(guān)色譜耗材
附錄a：5種類胡蘿卜素天然營養(yǎng)物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)
附錄a：5種類胡蘿卜素天然營養(yǎng)物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)