中文名稱： helixyte green 熒光 ssdna 定量試劑盒 針對酶標(biāo)儀進(jìn)行了優(yōu)化
英文名稱： helixyte™ green fluorimetric ssdna quantitation kit optimized for microplate readers
產(chǎn)品貨號： 17623
產(chǎn)品規(guī)格： 200 tests
供 貨 商： aat bioquest
產(chǎn)品參數(shù)
ex (nm) 498
em (nm) 519
產(chǎn)品概述
amplite 熒光 ssdna 定量試劑盒以簡單準(zhǔn)確的方式來檢測單鏈 dna。該試劑盒包含所有基本試劑，包括 helixyte green ssdna 試劑、稀釋緩沖液和預(yù)稀釋的 dna 標(biāo)準(zhǔn)品。 helixyte green ssdna 試劑是一種靈敏的熒光核酸探針，用于定量溶液中的寡核苷酸和單鏈 dna (ssdna)。它使科研人員能夠量化低至 100 pg/ml 的寡核苷酸或 ssdna。這種靈敏度超過吸光度方法的 10,000 倍以上。使用該試劑盒，可檢測低至 1 ng/ml 的寡核苷酸或 ssdna。使用該試劑盒對一些 ssdna 進(jìn)行了定量，包括具有相似靈敏度的 m13 和 φx174 病毒 dna 以及變性小牛胸腺 dna。它們的檢測限不受核酸試劑中常見污染物的明顯干擾，包括鹽類、尿素、乙醇、氯仿、去污劑、蛋白質(zhì)、atp、核苷酸和六堿基短寡核苷酸等。然而，雙鏈 dna (dsdna) 和 rna 確實(shí)會干擾檢測，因?yàn)?helixyte green ssdna 試劑會與 dsdna 和 rna 結(jié)合以產(chǎn)生熒光信號。 amplite 熒光 ssdna 定量試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可使用熒光酶標(biāo)儀定量 dsdna。
適用儀器
熒光酶標(biāo)儀
ex:490 nm
em：525 nm
cutoff：515 nm
推薦孔板:純黑色孔板
實(shí)驗(yàn)方案
概述
1.添加 100 µl ssdna 標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品
2.添加 100 µl helixyte green ssdna 工作溶液
3.在室溫下孵育 5-10 分鐘
4.檢測 ex/em=490/525 nm 處的熒光強(qiáng)度
注：以下方案是使用 helixyte green ssdna 定量總核酸含量的示例。 打開前讓所有成分升溫至室溫。 目前沒有發(fā)現(xiàn)關(guān)于 helixyte green ssdna 染色劑的致突變性或毒性的數(shù)據(jù)。 由于該試劑與核酸結(jié)合，因此應(yīng)將其視為潛在的誘變劑并小心處理。 應(yīng)特別小心處理 dmso 原液，因?yàn)橐阎?dmso 可促進(jìn)有機(jī)分子進(jìn)入組織。
溶液制備
ssdna 標(biāo)準(zhǔn)溶液
將 10 ul 100 ug/ml ssdna 標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分 c）添加到 190 ul 檢測緩沖液（組分 b）中以獲得 5 ug/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后進(jìn)行 1:3 稀釋以獲得連續(xù)稀釋的 ssdna 標(biāo)準(zhǔn)溶液（ss2- ss7）。請使用aat bioquest連續(xù)稀釋計(jì)算器以方便數(shù)據(jù)處理。
helixyte green ssdna 工作溶液
將 100 μl helixyte green ssdna（組分 a）加入 10 ml 檢測緩沖液（組分 b）中，制備 helixyte green ssdna 工作溶液。 通過用箔紙覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo(hù)工作溶液免受光照。
注意：建議在塑料容器而不是玻璃容器中制備工作溶液，因?yàn)槿玖峡赡軙降讲ＡП砻?。為獲得效果，該溶液應(yīng)在稀釋后幾小時(shí)內(nèi)使用。
注意：10 ml 的工作溶液對于一個(gè) 96 孔板就足夠了。
操作步驟
表 1. 純黑色 96 孔板中 ssdna 標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。 ss= ssdna 標(biāo)準(zhǔn)品（ss1 - ss7，1667 至 2.3 ng/ml）； bl=空白控制； ts=測試樣品
bl
bl
ts
ts
ss1
ss1
...
...
ss2
ss2
...
...
ss3
ss3
ss4
ss4
ss5
ss5
ss6
ss6
ss7
ss7
表2.各孔試劑組成
孔
體積
試劑
ss1-ss7
100ul
連續(xù)稀釋（1667 至 2.3 ng/ml）
bl
100ul
緩沖液
ts
100ul
樣品
1.根據(jù)表 1和表 2 中提供的布局準(zhǔn)備 ssdna 標(biāo)準(zhǔn) (ns)、空白對照 (bl) 和測試樣品 (ts)。對于 384 孔板，每孔使用 25 μl 試劑，而不是 100 μl。
2.將 100 µl helixyte green ssdna 工作溶液加入 ssdna 標(biāo)準(zhǔn)品、空白對照和測試樣品的每個(gè)孔中，使測定體積為 200 µl/孔。 對于 384 孔板，將 25 µl 的 helixyte green ssdna 工作溶液添加到每個(gè)孔中，以獲得 50 µl/孔的總體積。
3.在室溫下孵育反應(yīng) 5 到 10 分鐘，避光。
4.使用 ex/em = 490/525 nm（cutoff在 515 nm 處）的熒光酶標(biāo)儀檢測熒光增加。
圖示
圖 1. ssdna 劑量反應(yīng)是在 96 孔黑色孔板中使用 amplite fluorimetric ssdna 定量試劑盒測量的。
關(guān)鍵詞：酶標(biāo)儀 熒光酶標(biāo)儀