高效液相色譜儀主要是應(yīng)用高效液相色譜原理,是用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。
根據(jù)分離機(jī)制的不同，可分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法(正相與反相)、離子交換色譜法及分子排阻色譜法。
1、液固吸附色譜法
液固吸附色譜法中，固體吸附劑是固定相，根據(jù)各組分吸附能力差異使得組分得以分離。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，大多數(shù)用于非離子型化合物。吸附色譜固定相可以分為極性和非極性兩大類。對(duì)流動(dòng)相的要求為：
1) 選用的溶劑應(yīng)當(dāng)與固定相互不相溶，并能保持色譜柱的穩(wěn)定性。
2) 選用的溶劑應(yīng)有高純度，以防所含微量雜質(zhì)在柱中積累，引起柱性能的改變。
3) 選用的溶劑性能應(yīng)與所使用的檢測(cè)器相匹配，如果使用紫外吸收檢測(cè)器，就不能選用在檢測(cè)波長下有紫外吸收的溶劑；若使用示差折光檢測(cè)器，就不能用梯度洗脫。
4) 選用的溶劑應(yīng)對(duì)樣品有足夠的溶解能力，以提高測(cè)定的靈敏度。
5) 選用的溶劑應(yīng)具有低的黏度和適當(dāng)?shù)偷姆悬c(diǎn)。
6) 應(yīng)盡量避免使用具有顯著毒性的溶劑，以保證工作人員的安全。
液固色譜法是以表面吸附性能力為依據(jù)的，所以它常用于分離極性不同的化合物，也能分離那些具有相同極性基團(tuán)，但數(shù)量不同的樣品。
2. 液液分配色譜法
固定相為液體，根據(jù)被分離的組分在流動(dòng)相和固定相中的溶解度不同而分離。正相色譜法和反相色譜法可根據(jù)依固定相和流動(dòng)相的極性不同區(qū)分。正相色譜法采用極性固定相，流動(dòng)相為相對(duì)非極性的疏水性溶劑，常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物；反相色譜法一般用非極性固定相，流動(dòng)相為水或緩沖溶液，適用于分離非極性和極性較弱的化合物。其中，反相色譜應(yīng)用*。
3. 離子交換色譜法
固定相是離子交換樹脂。樹脂上可電離離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的離子及被測(cè)組分的離子進(jìn)行交換，根據(jù)各離子與離子交換基團(tuán)具有不同的電荷吸引力而分離。
4. 分子排阻色譜法
分子排阻色譜法也稱凝膠色譜法，是按照分子尺寸大小順序進(jìn)行分離的一種色譜方法。分子排阻色譜法的固定相凝膠是一種多孔性的聚合材料，有一定的形狀和穩(wěn)定性，利用分子篩對(duì)分子量大小不同的各組分排阻能力的差異而完成分離。根據(jù)所用流動(dòng)相的不同，凝膠色譜法可以分為兩類：即用水溶劑做流動(dòng)相的凝膠過濾色譜法(gfc)與用有機(jī)溶劑如四氫呋喃做流動(dòng)相的凝膠滲透色譜法(gpc)。