本實驗利用液相色譜法對番石榴葉粉中鞣花酸的含量進行測定，為更廣泛地開展番石榴葉開發(fā)利用提供理論和。
1材料與方法
1.1材料與試劑
番石榴葉片，鞣花酸標準品美國fluka公司；甲醇(色譜純)；甲醇、鹽酸(均為分析純)。
1.2儀器與設備
lc-20ad液相色譜儀(配spd-20a紫外檢測器、sil-20a自動進樣器及cto-10a柱溫箱)日本島津公司；universal32r高速臺式冷凍離心機德國hettich公司；elix5超純水儀美國millipore公司。
1.3標準溶液的配制
準確稱取鞣花酸標準品40mg，轉移至100ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到質量濃度均為400mg/l的混標溶液，隨后逐級稀釋至0.5、1、5、10、20、50、100、200mg/l。
1.4色譜分析條件
色譜柱為intersilods-sp色譜柱(250mm×4.5mm，5μm)，柱溫35°c，流動相為3%冰乙酸(a)-甲醇(b)，梯度洗脫程序：0～4minb由20%升至45%，保持6min，10～15minb由45%升至70%，15～20min升至100%，保持1min；進樣體積10μl。
1.5樣品處理
將所摘取的新鮮番石榴葉片分老葉、嫩葉、成熟葉，于105°c烘至質量恒定，用粉碎機打成粉，分別準確稱取1.0g粉末，放入100ml單頸瓶中，加入甲醇(含0.01%hcl)30ml，于70°c攪拌回流，2h后取出冷卻，用whatman4號濾紙過濾，即得番石榴葉片粗提取液，置4°c冰箱備用。每個樣品設3次重復。
2結果與分析
2.1標準曲線的制作
取各級標準溶液，進樣10μl，所得的色譜圖疊加如圖1所示，以標樣質量濃度y/(mg/ml)為縱坐標、標樣峰面積x/mv為橫坐標，繪制標準溶液曲線，計算線性回歸方程為y=108711x－45231，線性范圍為0.5～200mg/l，相關系數(shù)為0.9998。
2.2精密度實驗
將同一番石榴葉提取液樣品(樣品代號2010.6.25)分裝于10個樣品瓶中，在同一天內重復進樣5次，測定峰面積，并計算相對標準偏差(rsd)來考查其測定的精密度，得出峰面積的rsd為0.6%，保留時間的rsd為0.06%。同時將該批樣品連續(xù)測定5d，得出峰面積的rsd為1.13%，說明精密度良好。
2.3回收率實驗
采用加標樣回收法，稱取番石榴葉3份，每份樣量1.0g，分別加入1000μg/ml的鞣花酸標準溶液0.5、1ml，其他均按1.5節(jié)方法進行，平行測定3次，計算回收率(回收率為用添加標樣樣品的測出量減去樣品測出量，再除以加入的標樣量，乘以100%)，結果見表3。結果表明平均回收率為95.86%～98.31%。
2.4樣品分析
2.4.1色譜分離效果
按照上述色譜條件，將嫩葉、成熟葉、老葉各樣品進樣10.0μl進行液相色譜分析，所得樣品色譜圖見圖2，與標準色譜圖(圖1)比較，可確定峰1為鞣花酸，峰1與前后相鄰兩峰之間的分離度均大于1.5，說明該梯度洗脫方法可以成功地分離鞣花酸和其他組分。
2. 4.2番石榴葉片中游離鞣花酸含量
從表2可看出，番石榴葉片中游離鞣花酸含量以幼嫩葉居多，成熟葉次之，而老葉中不含鞣花酸。
3討論
番石榴葉提取物，必須采用梯度洗脫方法才能有效地分離鞣花酸和其他組分。