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丙酸蛛網菌PCR檢測試劑盒實驗使用方法

發(fā)布時間:2024-09-27
丙酸蛛網菌pcr檢測試劑盒實驗使用方法:
一、樣品 dna 的制備
用自選方法提取 cps dna。注意:dna 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 dna,后面的 pcr 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 cps 標準曲線(以 10-10e6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 dn**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μl 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 產品僅用于科研先將本試劑盒提供的陽性對照用 te 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10e7 拷貝/μl(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10e7拷貝/μl,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10e7 拷貝/μl)。
4. 在 6 號管中加入 5 μl 10e7 拷貝/μl 的 cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10e6 拷貝/μl 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μl 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10e5拷貝/μl 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μl 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。7. nc 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μl 和待測樣品一起進行定量 pcr(見下步),每個樣品做 3 次重復。pcr 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 pcr ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
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