溫度對發(fā)酵過程的影響及其控制
在發(fā)酵過程中需要維持生產(chǎn)菌的生長和產(chǎn)物合成的適當發(fā)酵條件,其中中的員就是溫度。溫度是保證各種酶活性的重要條件,微生物的生長和產(chǎn)物合成均需在其各自適合的溫度下進行。因此,在發(fā)酵過程中必須保證穩(wěn)定和適宜的溫度環(huán)境。
溫度的變化對發(fā)酵過程的影響表現(xiàn)在兩個方面:方面通過影響生產(chǎn)菌的生長繁殖及代謝產(chǎn)物的合成而影響發(fā)酵過程;另方面通過影響發(fā)酵液的物理性質(zhì)(如發(fā)酵液的黏度、基質(zhì)和氧在發(fā)酵液中的溶解度和傳遞速率等)影響發(fā)酵的動力學特性和產(chǎn)物的生物合成。從酶促反應(yīng)動力學來看,溫度升高,反應(yīng)速率加大,微生物生長代謝加快,產(chǎn)物生成提前,從而縮短發(fā)酵周期。但是,酶是很易熱失活的生物大分子,溫度愈高失活愈快,從而影響代謝產(chǎn)物,特別是次代謝產(chǎn)物的生成,影響終產(chǎn)物產(chǎn)量。此外,溫度還能影響生物合成方向。個典型例子是溫度對金色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)四環(huán)素過程的影響,在低于30℃下,合成的能力較強,合成四環(huán)素的比例隨溫度的升高而增大,當達到35℃時只產(chǎn)生四環(huán)素,而合成幾乎停止。
近年來,研究還發(fā)現(xiàn)溫度對代謝有調(diào)節(jié)作用。在低溫(20℃)時,氨基酸合成途徑的終產(chǎn)物對個酶的反饋抑制作用比在正常生長溫度(37℃)下更大。故可考慮在抗生素發(fā)酵后期降低發(fā)酵溫度,使蛋白質(zhì)和核酸的正常合成途徑提早關(guān)閉,從而使發(fā)酵代謝轉(zhuǎn)向目的產(chǎn)物合成。
溫度還能影響酶系組成及酶特性。例如,用米曲霉制曲時,溫度控制在低限,有利于蛋白酶合成,a活性受到抑制。又如,凝結(jié)芽孢桿菌的a熱穩(wěn)定性受培養(yǎng)溫度的影響是為明顯的,
55℃培養(yǎng)所產(chǎn)生的酶在90℃保溫60min,其剩余活性為88%~99%;在35c培養(yǎng)所產(chǎn)生的酶,經(jīng)相同條件處理,剩余酶活僅有6%~10%。
高溫會使微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)發(fā)生變性或凝固,同時還會破壞微生物細胞內(nèi)的酶活性,從而殺死微生物。溫度越高,微生物的死亡就越快,所以可以利用高溫滅菌。微生物對低溫的抵抗力般比高溫強,低溫只能抑制微生物生長,其致死作用較差。因此,可以利用低溫保存菌種。如果所培養(yǎng)的微生物能在較高些的溫度下進行生長繁殖,將對生產(chǎn)有很大好處,既可減少雜菌污染機會,又可減少由于發(fā)酵熱及夏季培養(yǎng)所需的降溫輔助設(shè)備和能耗。
工業(yè)生產(chǎn)上,所用的大發(fā)酵罐在發(fā)酵過程中般不需要加熱,因發(fā)酵釋放了大量的發(fā)酵熱,需要冷卻的情況較多。為了使發(fā)酵液溫度控制在定的范圍內(nèi),生產(chǎn)上常在發(fā)酵設(shè)備上安裝熱交換設(shè)備。例如,利用自動控制或手動調(diào)整的閥門,將冷卻水通入發(fā)酵罐的夾層或蛇型管中,通過熱交換來降溫,保持恒溫發(fā)酵。如果氣溫較高(特別是我南方的夏季),冷卻水的溫度又高,致使冷卻效果很差,達不到預(yù)定的溫度,就可采用冷凍鹽水進行循環(huán)式降溫,以迅速降到恒溫。因此,大的發(fā)酵廠需要建立冷凍站,提高冷凍能力,以保證在正常溫度下進行發(fā)酵。
在發(fā)酵過程中適溫度的控制,需要通過實際試驗來確定。就大多數(shù)情況來說,接種后培養(yǎng)溫度應(yīng)適當提高,以利于孢子萌發(fā)或加快菌體生長、繁殖,而且此時發(fā)酵的溫度大多數(shù)下降;待發(fā)酵液的溫度表現(xiàn)為上升時,發(fā)酵液溫度應(yīng)控制在菌體的適生長溫度;到主發(fā)酵旺盛階段,溫度應(yīng)控制在代謝產(chǎn)物合成的適溫度;到發(fā)酵后期,溫度出現(xiàn)下降趨勢,直至發(fā)酵成熟即可放罐。