胱an酸蛋白酶在細(xì)胞凋亡或程序性細(xì)胞死亡中是必需的，在發(fā)育和成年生活的大多數(shù)其他階段，并且因其在細(xì)胞中的作用而被稱為“k子手”蛋白質(zhì)。免疫系統(tǒng)中也需要一些半胱天冬酶用于淋巴細(xì)胞的成熟。細(xì)胞凋亡失敗是腫瘤發(fā)展和自身免疫疾病的主要原因之一。
百螢生物是aat bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的胱天蛋白酶caspase 3/7系列產(chǎn)品
試驗(yàn)方案
操作方法
以下說明書僅提供指南，實(shí)際應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。
1.使用amc，afc，pna，r110和prored底物的一般溶液caspase測定
1.1在dmso中制備10mm儲(chǔ)備溶液。
1.2制備2x半胱天冬酶底物（50μm）測定溶液，如下所示：
50 ul基質(zhì)原液
100l dtt（1m）
400l edta（100 mm）
10ml tris緩沖液（20mm），ph = 7.4
1.3將等體積的半胱天冬酶標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與2x半胱天冬酶底物測定溶液（來自步驟1.2）混合，并在室溫下孵育溶液至少1小時(shí)。
1.4使用熒光酶標(biāo)儀檢測熒光，或使用吸光度酶標(biāo)儀檢測吸光度。
2.細(xì)胞caspase檢測使用細(xì)胞滲透fmk半胱天冬酶探針
2.1在dmso中制備2-5mm儲(chǔ)備溶液。
2.2根據(jù)需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。
2.3通過用20mm hepes緩沖液（hhbs）稀釋hanks中的dmso儲(chǔ)備溶液（來自步驟2.1），制備2x可滲透的半胱天冬酶底物（20μm）測定溶液。
2.4用2x半胱天冬酶底物測定溶液（來自步驟2.3）混合等體積的處理細(xì)胞，并將細(xì)胞在37℃，5％co 2培養(yǎng)箱中孵育至少1小時(shí)。
2.5用hhbs洗滌細(xì)胞至少一次。
2.6用流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光強(qiáng)度。
3.細(xì)胞caspase檢測使用細(xì)胞滲透性fmk caspase探針（僅適用于＃13470-13476）
3.1通過向小瓶中加入50μldmso制備250x儲(chǔ)備溶液。
3.2根據(jù)需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。
3.3將250 x dmso儲(chǔ)備溶液（來自步驟3.1）以1：250的比例（例如2 ul至500 ul細(xì)胞）添加到細(xì)胞溶液中，并將細(xì)胞在37°c，5％co 2培養(yǎng)箱中孵育1 小時(shí)。
3.4用hhbs洗滌細(xì)胞至少一次。
3.5用流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光強(qiáng)度。
關(guān)鍵詞：熒光酶標(biāo)儀 酶標(biāo)儀 培養(yǎng)箱 流式細(xì)胞儀 熒光顯微鏡