qpcr擴增過程中，擴增產(chǎn)物的熒光信號達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時的所對應(yīng)的擴增循環(huán)數(shù)（cycle threshold）。c代表cycle，t代表threshold。簡單講，ct值就是qpcr中起始模板擴增達(dá)到一定產(chǎn)物量時，所對應(yīng)的循環(huán)數(shù)。那么你知道qpcr實驗中的ct值有什么作用嗎？讓我們一起來看看吧！
一、指數(shù)擴增、模板量與ct值的關(guān)系
理想情況下，qpcr中的基因經(jīng)過一定的循環(huán)數(shù)被指數(shù)擴增而積累，擴增循環(huán)數(shù)和產(chǎn)物量之間的關(guān)系是：擴增產(chǎn)物量=起始模板量×（1+en）循環(huán)個數(shù)。然而qpcr反應(yīng)并不是一直處于理想情況下，當(dāng)擴增產(chǎn)物量達(dá)到“一定產(chǎn)物量”時，此時循環(huán)個數(shù)為ct值，處于指數(shù)擴增時期。ct值與起始模板量的關(guān)系：模板的ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系。起始模板量濃度越高，ct值越??；起始模板量濃度越低，ct值越大。
二、擴增曲線、熒光閾值與一定產(chǎn)物量
qpcr擴增產(chǎn)物量是以熒光信號的形式直接呈現(xiàn)，也就是擴增曲線。在pcr早期，擴增處于理想情況下，循環(huán)數(shù)較少，產(chǎn)物積累少，產(chǎn)生熒光的水平不能與熒光本底背景明顯地區(qū)別，之后熒光的產(chǎn)生增加進入指數(shù)期?？梢栽趐cr反應(yīng)剛處于指數(shù)期的某一點上來檢測pcr產(chǎn)物的量，以此作為“一定產(chǎn)物量”，并且由此來推斷模板最初的含量。因此，一定產(chǎn)物量對應(yīng)的熒光信號強度，也就是熒光閾值。
在pcr的后期，擴增曲線不再呈現(xiàn)指數(shù)擴增，進入線性期和平臺期。
三、ct值的重現(xiàn)性
pcr循環(huán)在到達(dá)ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期，此時微小誤差尚未放大，因此ct值的重現(xiàn)性極hao，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的ct值是恒定的。
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